、目的
建立無菌室浮游菌測試標準操作程序,規(guī)范無菌室浮游菌的檢測。
2、范圍
適用于無菌室(包括潔凈工作臺)浮游菌的測試和環(huán)境驗證。
3、職責
QA、QC人員遵照執(zhí)行。
4、內(nèi)容
4.1 參考標準:GB/T 16293-2010
4.2 測試方法
本測試方法為計數(shù)濃度法,即通過收集懸浮在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基(選擇能證實其能夠支持微生物生長的培養(yǎng)基),經(jīng)若干時間和適宜的生長條件讓其繁殖到可見的菌落計數(shù),以判定該無菌室的微生物濃度。
4.3 測試儀器、輔助設備和培養(yǎng)基
浮游菌采樣器、培養(yǎng)皿(選用與儀器相適應的培養(yǎng)皿)、培養(yǎng)基、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器。
4.4 測試狀態(tài)及測試時間
4.4.1 靜態(tài)和動態(tài)兩種狀態(tài)均可進行測試,靜態(tài)測試時,室內(nèi)測試人員不得多于2人。
4.4.2 在靜態(tài)a測試時,單向流無菌室(區(qū)),測試在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行時間不少于10分鐘后開始;非單向流無菌室(區(qū)),測試在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30分鐘后開始。在靜態(tài)b測試時,單向流無菌室(區(qū)),測試在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過10分鐘自凈后開始;非單向流無菌室(區(qū)),測試在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20分鐘自凈后開始。
4.5 采樣點的確定
4.5.1 最少采樣點數(shù)目見表1,每次最小采樣量見表2。
4.5.2 采樣點位置布置宜力求均勻,避免采樣點在局部區(qū)域過于稀疏,采樣點按照《潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)控管理規(guī)程》附件×××車間潔凈度監(jiān)測采樣點布局圖的要求布置,每個采樣點一般采樣一次。
4.5.3工作區(qū)采樣點位置離地0.8m~1.5m左右(略高于工作面),送風口測點位置離開送風面30cm左右,可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點。
4.6 測試準備
4.6.1 采樣器在進入被測區(qū)域前先清潔表面,然后用75%酒精消毒一遍或存放于被測區(qū)域內(nèi),與被測試區(qū)域一起消毒(用于A級無菌室的采樣器必須預先放在被測房間內(nèi))。
4.6.2 A/B級區(qū)采用一次性培養(yǎng)皿,其它區(qū)域按無菌操作要求,在中檢室潔凈工作臺上提前制備培養(yǎng)備用(將滅菌后的培養(yǎng)基用水浴溶解,冷卻至約50-60℃,Φ90mm培養(yǎng)皿每個傾注約20ml培養(yǎng)基,Φ150mm培每個傾注約30ml培養(yǎng)基),培養(yǎng)皿加蓋后在室溫下放至凝固。自制好的培養(yǎng)皿在無菌室內(nèi)存放不超過48小時,2~8℃保存的培養(yǎng)皿一般不超過1周,一次性培養(yǎng)皿在標注的有效期內(nèi)使用,過期不得使用。
4.6.3 A/B級區(qū)使用的培養(yǎng)皿在區(qū)域消毒前一次性傳入,隨環(huán)境一起消毒,在消毒液取用間架子上暫存,在有效期內(nèi)使用。若需臨時傳入,則必須在前一天臭氧消毒前通過C級與B級傳遞窗傳入B級區(qū)進行臭氧消毒,第二天使用。傳入前表面也必須用75%酒精擦拭。其它區(qū)域用培養(yǎng)皿按物品傳入要求當天傳入使用。
4.6.4 采樣前,先用75%酒精清洗采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外面(FKC型浮游空氣塵菌采樣器用酒精清洗采樣頭)。
4.6.5 測試具體操作見“JYQ-Ⅱ型浮游菌采樣器標準操作程序或FKC-1型浮游空氣塵菌采樣器標準操作程序”。
4.6.6 采樣結(jié)束后,蓋上培養(yǎng)皿蓋子,在培養(yǎng)皿上標注所有信息(包括產(chǎn)品批號,放置位置等),將培養(yǎng)皿用適宜的方式捆扎,倒置于30~35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),培養(yǎng)時間不少于2天。
4.6.7 培養(yǎng)結(jié)束后逐個檢查培養(yǎng)皿,用肉眼對培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計數(shù)、標記,然后用5~10倍放大鏡檢查,有否遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊,可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。
4.7 測試記錄應包含以下內(nèi)容
4.7.1 被測試區(qū)域名稱、測試日期、測試依據(jù)、測試者姓名、測試儀器及測試方法的描述,測試時所采用的狀態(tài)和室內(nèi)測試人員數(shù),采樣點數(shù)目,測試次數(shù)、采樣流量,測試結(jié)果(包括所有統(tǒng)計計算資料)等。
4.7.2 若為動態(tài)測試,還應記錄現(xiàn)場操作人員數(shù)量,現(xiàn)場設備運轉(zhuǎn)情況等。
4.8 結(jié)果計算
4.8.1 用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。
4.8.2 每個測點的浮游菌平均濃度計算按下式進行
4.9 結(jié)果評定
4.9.1 每個測點的浮游菌平均濃度必須低于所選定評定標準中的界限。
4.9.2 在靜態(tài)測試時,若某測點的浮游菌平均菌濃度超過評定標準,則應重新采樣兩次,兩次測試結(jié)果均合格才能判為符合。
4.9.3 若有超過規(guī)定者,必須及時與生產(chǎn)部門聯(lián)系,對該區(qū)域進行消毒或其它處理,然后重新測試至合格。
4.10 日常監(jiān)控
4.10.1 浮游菌日常監(jiān)控設糾偏限度和警戒限度(限度范圍及取樣頻次見《潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)控管理規(guī)程》),以保證無菌室(區(qū))的微生物濃度受到控制,定期檢測以檢查微生物負荷以及消毒劑的效力,并作傾向分析。靜態(tài)和動態(tài)的監(jiān)控都可以采用該方法。
4.10.2 對于浮游菌的取樣頻次,如果出現(xiàn)下列情況應考慮修改,在評估以下情況后,也應確定其他項目的檢測頻次
——連續(xù)超過糾偏限度和警戒限度;
——停工時間比預計延長;
——關鍵區(qū)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)有污染存在;
——在生產(chǎn)期間,空氣凈化系統(tǒng)進行任何重大的維修;
——日常操作記錄反映出傾向性的數(shù)據(jù);
——消毒規(guī)程的改變;
——引起生物污染的事故等;
——當生產(chǎn)設備有重大維修或增加設備時;
——當無菌室(區(qū))結(jié)構(gòu)或區(qū)域分布有重大變動時。